Використовуючи цей безперервний аналіз, поведінка спарювання і частоту спарювання в конкретних умовах, можна визначити в експериментальних умовах навколишнього середовища. Щоб контролювати умови навколишнього середовища, ми перетворили кухонну шафу з нержавіючої сталі в випробувальну зону з власним джерелом світла і дифузією, що забезпечує високий рівень світла і мінімальна кількість відблисків з верхівки спаровуються арен (рис. 1А), Внутрішня випробувальний майданчик повністю герметизирована нержавіючої сталлю і склом, що дозволяє очищати органічні розчинники, такі як гексан або етанол. Крім того, шафа оснащений отворами, які виступають в якості впускних отворів для трубопроводів, приносячи летючі сигнали з системи стисненого повітря (див. Малюнки 1A і 1B). Система стисненого повітря, налаштована на запахи дріжджів, складається з повітряного потоку, що направляється через рідку дріжджову культуру перед тим, як увійти в тестові арени через 4 піпетки спліттера с10 точок (рис. 1C). Вся система герметична і забезпечена декількома фільтрами частинок, як до, так і після входу в дріжджову культуру, щоб мінімізувати забруднення плутаними запахами (рисунок 1B).
Щоб продемонструвати використання цього аналізу, ми перевірили, чи впливають волатильні сигнали від культури дріжджів на спаровування. Через 24 год через рідкі дріжджі культивували бульбашка повітря, а воздуховипуськниє отвори поміщали на вхід кожної сполученої арени (див. Малюнок 2А). Половина спаровуються аренах містила борошно з дріжджами (Їжа + дріжджі), а інша половина містила борошно без додавання дріжджів (Їжа - дріжджі). У чоловіків і жінок дикого типу були виявлені запахи, що виходять із зовнішнього культури дріжджів, і була зареєстрована їх частота спарювання. Щоб визначити, які змінні необхідні для пояснення графічних результатів, ми запускали моделі змішаних ефектів, включаючи або ісключаяНезавісімие змінні харчової середовища, дріжджовий повітря і взаємодія двох. Дані на малюнку 2B найкраще представлені моделлю, що включає незалежні змінні харчової середовища (p = 0,001) і повітря дріжджів (p = 0,061), але немає пояснює ефекту взаємодії. Незважаючи на те, що змінна повітря дріжджів не є суттєвою в цьому повному наборі даних, необхідно пояснити результати. Аналіз повітря дріжджів, виділених для харчової середовища, показує, що спаровуються пара не реагує на запахи дріжджів, коли в харчовій середовищі немає дріжджів (повітря: p = 0,992), але вони збільшують частоту їх спарювання в дріжджовому повітрі, коли дріжджі Також додається в харчову середовище (повітря: p = 0,018). Разом ці результати демонструють застосовність системи стисненого повітря для перевірки впливу запахів навколишнього середовища в поєднанні з умовами харчової середовища.
Ми також ілюструємо, як повітряна система під тиском може битьЗа рахунок додавання екологічних хімічних сигналів безпосередньо на тестову арену. Щоб продемонструвати, які конкретні дріжджові сполуки впливають на частоту спарювання, ми перевірили гіпотезу про те, що вміст амінокислот в дріжджах необхідно для його впливу на спаровування шляхом розміщення дози пептона (гідролізовані білків), що відповідає амінокислотам, що подається дріжджами в агарі Підкладка, що вистилає спаровуються арену . Ми також випробували необхідність оцтової кислоти, одного з основних летючих продуктів бродіння дріжджів, для збільшення частоти спарювання. Це було зроблено шляхом додавання оцтової кислоти безпосередньо до харчової середовищі. Самців і самців дикого типу відчували на аренах, що містять агар або агар з пептоном, з оцтовою кислотою або без неї безпосередньо в харчовій середовищі (фіг. 3В). Це створює дуже просту харчову середу і погану середу; Тому середня частота спарювання також зменшується в порівнянні з малюнком 2B. Дані на малюнку 3B найкраще представлені моделлю, включающейНезавісімие змінні харчової середовища (p = 0,002), повітря оцтової кислоти (p = 0,001) і взаємодія двох (p = 0,022). Сприйнятливість жінок зростає при наявності оцтової кислоти, але тільки в тому стані, в якому пептони присутній в середовищі. Це показує, що мухам необхідно одночасно відчувати амінокислоти і оцтову кислоту, щоб збільшити їх частоту спарювання (рис. 3B). Це демонструє, що додавання пахучих сполук безпосередньо на тестову арену може впливати на поведінку спарювання і що ці дії можуть бути виявлені в дуже простих умовах навколишнього середовища.
Малюнок 1: Схема експериментальної коробки і системи стисненого повітря з дріжджами. (A) Схематична ілюстрація захищається від навколишнього середовища спарювання, описаного в розділі 1. Опис анотованих чисел і стрілок: 1. світлова дошка з al Червоні вогні; 2. невеликий вентилятор; 3. 3 шари фільтрувального паперу, кожен шар складається з двох листів фільтрувального паперу; 4. скляна диффузионная пластина, яка спирається на кронштейни, прикріплені до 3 сторонам коробки; 5. великий вентилятор; 6. отвори для труб і кабелів; 7. експериментальна область; Велика стрілка, 50 см до скляної пластини; Середня стрілка, висота 35 см для кабельних отворів; І маленька стрілка, висота 7 см для отворів для труб. (B) Схематичне зображення рідкої дріжджовий культури з повітряним потоком, як описано в розділах 5, 6.4 і 6.5. Опис анотованих номерів: 1. одноразовий фільтр; 2. ковпачок з силіконовою перегородкою і вихідними отворами; 3. рідке середовище; І 4. скляну трубку зі скловолокном. (C) Схематична ілюстрація повітропроводів, як описано в розділі 6.7. Опис анотованих номерів: 1. серологічна піпетка; 2. Трубка вирізається з 1 мл шприца і 3. 1000 мкл наконечника піпеткі.Target = "_ blank"> Натисніть тут, щоб переглянути збільшену версію цього малюнка.
Малюнок 2: Запах дріжджів збільшує сприйнятливість жінок в присутності дріжджів в харчовому субстраті. (A) Схематична ілюстрація сполученої арени з одного охоплює і однією самкою і наконечником піпетки від випускного отвору для повітря на фіг. 1C, що надходять через вхідний отвір. (B) Графічне представлення реакції при частоті спарювання пари спарювання Canton-S з запахом дріжджів з дріжджами і без дріжджів в живильному середовищі для мух (Їжа - дріжджі: середній повітря n = 12, дріжджовий повітря n = 13 і їжа + дріжджі: Середній повітря n = 24, повітря дріжджів n = 23). Лінійний графік з помилками SEM і статистичний висновок моделей змішаних ефектів з повітрям як незалежна змінна і дата як випадкова величина для кожної харчової середовища незалежно. Основна статістікаL модель включає їжу (p = 0,001) і повітря дріжджів (p = 0,061). Адаптовано із заслання 5. Натисніть тут, щоб переглянути збільшену версію цього малюнка.
Малюнок 3: Оцтова кислота в мухомолекулярном субстраті підвищує сприйнятливість жінок в присутності пептона. (A) Схематична ілюстрація сполученої арени з мухомольной харчової середовищем, що містить оцтову кислоту, і пластикової пробкою з парафіну та плівки, що закриває вхідний отвір. (B) Графічне представлення частоти спарювання пари спарювання Canton-S у відповідь на оцтову кислоту або на агаровой, або пептонною середовищі (агар: оцтова кислота n = 52, + оцтова кислота n = 40 і пептони: -оцтової кислота N = 28, + оцтова кислота = 25). Графік рядків з помилками SEM і stati (P = 0,002), повітря оцтової кислоти (p = 0,001) і харчової повітря (p = 0,022) в якості незалежних змінних і дату як випадкову величину. Адаптовано із заслання 5. Натисніть тут, щоб переглянути збільшену версію цього малюнка.
